INTRODUCCIÓN
El objetivo de este ensayo, realizado en la Universidad de Minnesota (EE.UU.) en 2018, fue determinar si el conservante natural (anillo cimenol) a diferentes concentraciones (1000, 700, 400 y 200 ppm) puede inactivar Clostridium perfringens, después de tiempos de contacto de 10 minutos, 20 minutos, 60 minutos y 24 horas.

METODOLOGÍA
1.    Se prepararon las siguientes concentraciones de conservante natural (con anillo cimenol) en agua estéril por ósmosis inversa: 2000, 1400, 800 y 400 ppm.
2.    Se retiraron 1 ml de los 4 viales y se colocaron en 4 nuevos. 1 vial extra se preparó como control con sólo 1 ml de agua estéril por ósmosis inversa.
3.    A los 5 viales se les añadió 1 ml de cultivo overnight enriquecido de Clostridium perfringens. Las diluciones finales del conservante natural (con anillo cimenol) fueron: 1000, 700, 400 y 200 ppm, respectivamente.
4.    Todos los viales se incubaron a temperatura ambiente (25ºC) en condiciones de anaerobiosis. 
5.    Después, en diferentes puntos temporales (10 min, 20 min, 60 min y 24 h) se retiraron 200 μl de cada vial y se prepararon diluciones decimales seriadas (de 10⁰ a 10^-7) en PBS como diluyente. 
6.    Más adelante, se transfirieron 100 μl de cada muestra diluida una Placa de Petri distinta, que contenían medio TSA (trypticase soy agar). 
7.    Las placas se incubaron a 37ºC durante 24 horas en condiciones de anaerobiosis. 
8.    Las placas con inoculado se examinaron y se contaron el número de colonias bacterianas. 
9.    Se calcularon y registraron en una tabla los títulos bacterianos propios de todos los viales. 

RESULTADOS
La tabla muestra que la dilución de 1000 ppm a las 24 horas posincubación es la única que alcanzó >99,99% de inactivación de CFU. Concentraciones inferiores de conservante consiguieron inactivaciones del 98,45% y 70%, a 700 y 400 ppm respectivamente y también a las 24 horas posincubación. 

CONCLUSIONES
El conservante con anillo cimenol es efectivo frente a C. perfringens y su eficacia se relaciona con la dosis y el tiempo de contacto con el patógeno. 

El anillo cimenol, fabricado por Biovet S.A., está disponible comercialmente con el nombre de Alquermold Natural.